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技術簡介

      染色體步移(Chromosome walking)，又稱為基因組步移（Genome walking），是指由生物基因組或基因組文庫中的已知序列出發，逐步探知其旁鄰的未知序列或與已知序列呈線性關系的目標序列的方法。對于已經完成基因組測序的模式生物種(如人、小鼠、線蟲、水稻、擬南芥等)，可直接從數據庫中輕松的找到已知序列的側翼序列。但是目前為止，自然界中大多數生物基因組DNA序列仍未知，要想知道一個已知區域兩側的DNA序列，染色體步移無疑是一種非常有效的方法。

      TAIL-PCR (Thermal Asymmetric Interlaced PCR)，即熱不對稱PCR，又叫巢式PCR，克服了傳統染色體步移法（如構建文庫步移法、反向PCR法、連接接頭法等）操作復雜、非特異性擴增、連接效率低等弊端。其原理是，根據已知 DNA 序列，分別設計三條同向且退火溫度較高的特異性引物(SP Primer)，與經過獨特設計的退火溫度較低的簡并引物進行熱不對稱 PCR 反應。通常情況下，其中至少有一種兼并引物可以與特異性引物之間利用退火溫度的差異進行熱不對稱 PCR 反應，一般通過三次巢式 PCR 反應即可獲取已知序列的側翼序列。如果一次實驗獲取的長度不能滿足實驗要求時，還可以根據第一次步移獲取的序列信息，繼續進行側翼序列獲取。

應用領域

1. 鑒定T-DNA或轉座子的插入位點，鑒定轉基因技術所導致的外源基因的插入位點； （2）根據基因的已知片段、EST或插入的轉座子序列克隆目的基因，分離基因的啟動子及調控元件；

2. 用于人工染色體PAC、YAC和BAC的片段搭接；

3. 構建圖位克隆中的重疊群；

4. 轉化標記輔助育種中的STS或SCAR標記等

服務內容

服務流程

1.已知序列的驗證

根據客戶提供的已知序列設計引物，以材料的基因組DNA為模板進行PCR擴增，以驗證已知序列是否在模板中存在。

2. 5' 或3' 未知序列的獲取

根據已知序列設計3條高退火溫度的特異性下游或上游引物，同時使用低退火溫度的簡并引物,利用特異性引物與簡并引物之間退火溫度的差異進行不對稱PCR，通過三次巢式PCR獲取側翼序列。

3. 對獲取的序列進行驗證

獲取側翼未知序列后，我們將分別在已知和未知序列上設計引物進行PCR擴增并對PCR產物進行測序,以驗證獲取序列的真實性。

樣品與實驗結果

實驗結果示例